La cromatografia de capa fina és un mètode d’anàlisi química basat en l’ús d’una capa sorbent amb un gruix de 0,1-0,5 mm com a fase estacionària. El mètode TLC es pot utilitzar en diversos camps i permet determinar una gran varietat de compostos químics.
Principi del mètode
El mètode de cromatografia de capa fina va néixer a partir de la cromatografia de paper i els primers experiments es van dur a terme als anys 80 del segle XIX. L'ús actiu d'aquesta anàlisi va començar només després de 1938.
La tècnica TLC inclou una fase mòbil (eluent), una fase estacionària (sorbent) i un analit. La fase estacionària s'aplica i es fixa en una placa especial. La placa es pot fer de vidre, alumini o plàstic: són substrats reutilitzables que s’han de rentar, assecar i preparar a fons per a l’aplicació del sorbent després de cada ús. També és possible utilitzar plats de paper que s’eliminen després de l’ús.
El gel de sílice s'utilitza amb més freqüència com a fase estacionària, però és possible utilitzar altres sorbents, per exemple, òxid d'alumini. Quan s’utilitza aquest o aquell sorbent, s’ha de seguir estrictament la tecnologia perquè el resultat sigui precís, per exemple, perquè el gel de sílice pot donar un resultat incorrecte si l’aire del laboratori és massa humit.
Els dissolvents s’utilitzen com a fase mòbil, per exemple, aigua, àcid acètic, etanol, acetona, benzè. L’elecció d’un dissolvent s’ha de prendre amb responsabilitat, ja que el resultat de la cromatografia depèn directament de les seves qualitats (viscositat, densitat, puresa). Es selecciona un dissolvent individual per a cada mostra analitzada.
Anàlisi
La mostra s’ha de diluir en un dissolvent. Si no es produeix una dissolució completa i queden massa impureses, la mostra es pot netejar mitjançant extracció.
L'aplicació de la mostra a la placa es pot fer de forma automàtica o manual. L’aplicació automàtica utilitza un mètode de microspray on cada mostra s’aspara a la zona adequada del substrat. Per a l'aplicació manual, s'utilitza una micropipeta. Es col·loquen marques de llapis al plat per a cada mostra. Cada mostra s'aplica amb un capil·lar a la placa en una línia a una distància suficient de les marques per no reaccionar amb el carboni del plom.
La placa es col·loca en un recipient, al fons del qual s’aboca l’eluent. El suport es col·loca amb una vora al recipient fins a la línia marcada. El recipient està ben tancat per evitar l'evaporació de la fase mòbil. Sota l’acció de les forces capil·lars, l’eluent comença a pujar per la capa sorbent. Quan l’eluent arriba a un nivell determinat, la placa es retira del recipient i s’asseca.
Si la substància desitjada no té color, no serà visible al substrat. Per tant, es realitza la visualització: processament de la placa amb vapor de iode o altres colorants.
Després d’aquest processament, s’avalua el resultat. Al sorbent apareixen zones de colors d’intensitat variable. Per determinar una substància (o un grup de substàncies), es comparen les àrees de colors, la seva mida, intensitat i mobilitat amb una mostra de referència.
El mètode TLC s’utilitza àmpliament perquè és ràpid, barat, precís, intuïtiu, no requereix equips complexos i és fàcil d’interpretar.
